PROTOCOLO DE TINCIÓN CON SOLUCIÓN DE PLATA

Precauciones:
• Utilizar guantes en todo momento para evitar la contaminación con queratina.

Recomendaciones:
• Lavar recipiente de tinción previo a su uso con metanol o etanol puro y luego secar a temperatura ambiente.
• Preparar el gel el día anterior a la corrida, para eliminar acrilamida que puede reaccionar con las proteínas.
• Evitar en la preparación de la muestra: sales (suprimen la señal, interfieren con la ionización y forman aductos), detergentes (inhiben la ionización) y solventes orgánicos no volátiles (retardan la cristalización de la matriz).

Protocolo de tinción:

1. Al finalizar la electroforesis fijar el gel en solución de fijación metanol 50% v/v / ácido acético 5% v/v durante 20 min.

2. Remover la solución de fijación y lavar el gel en metanol 50% v/v para eliminar el ácido remanente. Repetir 1 vez más.

3. Incubar el gel en tiosulfato de sodio 0,02% p/v durante 1 min (solución de sensibilización), luego lavar el gel dos veces con agua durante 1 min.

4. Incubar el gel en solución de nitrato de plata 0,1% p/v (previamente mantenida refrigerada) durante 20 min a 4ºC.

5. Descartar la solución de plata, y lavar el gel dos veces con agua durante 1 min y a continuación revelar en carbonato de sodio 2% p/v que contiene formaldehído 0,04% v/v, mantener en agitación. Una vez que la solución reveladora presente coloración amarilla descartarla y reemplazar con nueva solución de revelado.

6. Descartar la solución de revelado una vez que se haya alcanzado la intensidad de tinción deseada y lavar el gel con ácido acético 5% v/v.

7. Los geles teñidos con plata se pueden almacenar en ácido acético 1% v/v a 4ºC hasta su análisis.